小鼠原代腎小球系膜原代細胞
細胞培養(yǎng)操作:
收貨處理取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)
傳代密度細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)
傳代代數(shù)可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)
傳代比例傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿
傳代方法:
1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養(yǎng)基終止消化;
3.用吸管輕輕吹打混勻,按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4.待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。
商品屬性:
規(guī)格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 | 貨號 | EY-XY3646 |
種屬來源 | 小鼠 | 組織來源 | 腎 |
生長特性 | 貼壁生長 | 形態(tài)特征 | 成纖維細胞樣 |
形態(tài):成纖維細胞樣
培養(yǎng)基:小鼠腎小球系膜細胞
培養(yǎng)環(huán)境:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
傳代特征:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)
細胞基本屬性:
種屬來源:小鼠
組織來源:腎腎
生長特性:貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格:5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率:每2-3天換液一次
消化液:
產(chǎn)品貨期:5-6周左右
運輸方式:T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞(包郵)
供應(yīng)限制:僅限于科學(xué)研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
背景介紹::小鼠腎小球系膜細胞采用機械研磨法結(jié)合不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩過濾后使用膠原酶消化制備而來,小鼠腎小球系膜細胞分離自腎小球組織;腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢,被鮑氏囊所包裹,是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管,匯流入靜脈,而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi),微血管受到高壓,而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后,形成濾液,滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體,腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球系膜是位于腎小球毛細血管袢之間的一種特殊間充質(zhì),由系膜細胞和系膜基質(zhì)組成。腎小球系膜細胞是腎小球內(nèi)非?;钴S的細胞,具有分泌細胞基質(zhì)、產(chǎn)生細胞因子、吞噬和清除大分子物質(zhì)及類似平滑肌細胞收縮的功能。腎小球系膜細胞增生和基質(zhì)的過多產(chǎn)生是多種腎小球腎炎的主要病理表現(xiàn)。腎小球系膜細胞的培養(yǎng)是研究系膜擴張、瘢痕形成和腎小球硬化的理想方法。系膜細胞的主要作用可能有:①收縮作用,入球小動脈和出球動脈的收縮作用受系膜細胞的調(diào)節(jié),以影響毛細血管袢的內(nèi)壓和濾過率;②支持作用,它填充于毛細血管袢之間,支持毛細血管的位置;③吞噬作用,能吞噬被阻留在基膜內(nèi)的大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì);④分泌腎素,在腎缺血或免疫復(fù)合物沉積時,系膜細胞增生且分泌腎素。腎系膜細胞是腎小球內(nèi)非?;钴S的細胞,具有分泌細胞基質(zhì)、產(chǎn)生細胞因子、吞噬和清除大分子物質(zhì)及類似平滑肌細胞收縮的功能。同時還可產(chǎn)生和降解多種細胞外基質(zhì),參與系膜基質(zhì)及腎小球基底膜的修復(fù)與更新,在腎小球生理功能和病理反應(yīng)中起著重要作用。
原代細胞培養(yǎng)的主要步驟包括:
?一、剝離組織,去除外膜、結(jié)締組織等?:將組織從動物體中取出,并去除可能存在的外膜或結(jié)締組織等雜質(zhì)。
二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?:使用生理鹽水或其他適當?shù)木彌_液洗滌組織,然后將其剪成約1mm大小的小塊。
三、?用0.1%~0.2%的消化?:將剪碎的組織塊加入含有0.1%~0.2%的緩沖液中,進行消化。消化時間可根據(jù)具體實驗需求選擇熱消化(37℃)或冷消化(4℃),熱消化時間短,冷消化時間長但條件更溫和。
?四、吹打分散后,過濾、計數(shù)?:將消化后的細胞吹打到一個離心管中,然后過濾、計數(shù)。
五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?:將計數(shù)后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。
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